Không có gì khó hiểu khi Maomao (Miêu Miêu) là một trong những nhân vật được yêu thích nhất trong anime Dược sư tự sự. Cô nàng là nhân vật chính của phim đồng thời cũng là một dược sĩ tài năng có xuất thân từ Kỹ viện trấn. Maomao có vẻ ngoài nhỏ nhắn với mái tóc màu xanh lá đậm khá đặc biệt. Điều khiến Maomao được nhiều người yêu thích và mến mộ bởi cô là một cô gái trẻ thông minh và tài năng - người đã nỗ lực phấn đấu trở thành dược sư có tiếng trong triều đình hoàng gia Trung Quốc.

Niềm đam mê đối với việc nghiên cứu chất độc và thảo dược của Maomao xuất phát từ việc cô được nhận nuôi bởi một dược sĩ nổi tiếng. Maomao tự tiến hành nghiên cứu về tác dụng của những loại thuốc đó, do vậy trên cơ thể cô đôi khi sẽ xuất hiện một vài vết thương do việc tự thí nghiệm nhiều lần. Maomao yêu thích việc điều chế thuốc tới mức khi cô nhìn thấy có những loại thảo dược mới được phát hiện, cô sẽ có những phản ứng khá đáng yêu và rõ rệt như: Má đỏ bừng, mắt sáng lên,...

Trong phim Dược sư tự sự, Maomao được triệu hồi đến triều đình hoàng gia để làm việc trong cung điện với tư cách là một dược sư. Khi sống trong cung, cô phải đối mặt với những âm mưu tranh đấu quyền lực và đôi khi phát hiện ra cả những bí mật nguy hiểm. Mặc dù Maomao không nắm trong tay quyền lực địa vị hay quyền lực chính trị bởi cô thực chất chỉ là một cung nữ, nhưng thông qua kiến thức và sự thông minh của mình, Maomao tìm cách để tồn tại và bảo vệ chính mình trong môi trường đầy những âm mưu thủ đoạn tàn khốc này.

Bên cạnh nhân vật Maomao thì Jinshi (Nhâm Thị) cũng là một trong những nhân vật thu hút sự chú ý không kém trong anime Dược sư tự sự. Thân phận của Jinshi từng là một trong những chủ đề được nhiều người quan tâm nhất trong phim. Jinshi thu hút lượng fan đông đảo nhờ vào vẻ đẹp phi giới tính của mình - vừa mang chút gì đó nhẹ nhàng nhưng vẫn có phần nam tính. Gọi anh chàng là "hotboy nội cung" cũng không có gì là quá khi chỉ cần mỗi lần Jinshi xuất hiện, cung nữ trong cung đều sẽ vây lấy anh chàng ngay lập tức.

Jinshi có thân phận một thái giám được giao nhiệm vụ giám sát nội cung, anh chàng thường xuyên nhờ tới sự giúp đỡ của Maomao trong việc giải quyết những bí ẩn trong cung điện, đổi lại anh chàng sẽ đưa cho Maomao những loại thuốc quý hiếm. Trong phim, Jinshi và Maomao gặp nhau khi Maomao được triệu hồi đến cung điện để làm việc với tư cách một dược sư. Jinshi và Maomao có ấn tượng ban đầu về nhau không được tốt đẹp cho lắm, tuy nhiên dần dần trải qua nhiều tình huống, họ trở thành đồng đội thân cận và thậm chí sau đó, Jinshi còn đơn phương đem lòng yêu thích Maomao.

Thường xuất hiện với bộ đồ của quan chức trong triều đình, Jinshi thực chất là anh trai của hoàng đế và thường được gọi là "Hoàng tử mặt trăng", chức vụ thái giám chỉ là để che đi thân phận thực của Jinshi. Dù thường xuyên trêu chọc Maomao nhưng chỉ cần cô có điều gì cần tới sự giúp đợ, Jinshi sẽ không ngần ngại và có mặt ngay lập tức.

Vương hậu Gyokuyou (Ngọc Diệp) thu hút người hâm mộ nhờ vào vẻ ngoài xinh đẹp và tính cách dễ chịu của mình. Dù chỉ là một nhân vật phụ song tần suất xuất hiện của vị vương hậu xinh đẹp khá nhiều. Cô là con gái của Gyokuen - Thống đốc của thủ đô phía Tây. Vương hậu Gyokuyou là một trong những vương hậu được hoàng đế sủng ái bậc nhất, cô cũng chính là mẹ của đại công chúa Lingli. Sau này, vương hậu Gyokuyou đã được thăng chức lên thành hoàng hậu. Thời gian ở trong cung, Maomao chủ yếu làm cung nữ phục vụ dưới trướng vương hậu Gyokuyou.

Vương hậu Gyokuyou có một vẻ ngoài đặc biệt với đôi mắt xanh ngọc bích trong veo, mái tóc đỏ nhạt thường xuyên được vấn cao lên gọn gàng nhưng không kém phần quyến rũ. Theo mô típ phim, nguyên tố đại diện cho Gyokuyou là lửa, do vậy tính cách của cô vừa tốt bụng nhưng vẫn giữ được sự uy nghiêm và quyền uy của mình, xứng đáng với địa vị của bản thân hiện tại. Cô được nhiều người trong cung yêu mến nhờ vào sự khôn khéo, tính cẩn trọng và sự nhạy bén với vấn đề chính trị.

Không chỉ là một bông hoa sắc nước hương trời, Gyokuyou còn là một người phụ nữ thông minh và hiểu biết. Lớn lên trong một gia đình thương gia, Gyokuyou có vốn hiểu biết sâu rộng ở mảng tài chính và thương mại. Với những điểm cộng to lớn đó, không khó hiểu khi Gyokuyou không những được hoàng thượng yêu thương bậc nhất mà cô còn chiếm được cảm tình của đông đảo khán giả xem phim.

Gaoshun (Cao Thuận) cũng là một trong những nhân vật được yêu thích nhất series Dược sư tự sự dù anh chỉ là một nhân vật phụ. Gaoshun gây ấn tượng với khán giả nhờ vào vẻ ngoài khá lạnh lùng với đôi mắt đen và mái tóc ngắn. Gaoshun có độ tuổi là 36, tuy nhiên vẻ ngoài của anh chàng trẻ hơn rất nhiều so với độ tuổi đó, mặc dù vậy thì do suy nghĩ quá nhiều nên những nếp nhăn ở giữa trán và mắt của Gaoshun hiện lên khá rõ ràng. Tên của Gaoshun được cho là lấy cảm hứng từ một vị tướng có thật thời Chiến quốc tên Gao Shun (Tạm dịch: Cao Thuận) phục vụ dưới trướng của Lã Bố. Cao Thuận được cho là bộ tướng mạnh nhất trong lực lượng quân của Lã Bố.

Gaoshun là quan cận thần bên cạnh Jinshi và hỗ trợ Jinshi nhiều trong việc duyệt sổ sách cùng với một vài việc khác ở trong và ngoài cung điện. Gaoshun khá thông minh, siêng năng và tiếp thu kiến thức nhanh, do vậy không quá khó khăn cho Gaoshun khi tham gia cố vấn cho những việc liên quan tới chính trị. Là một trợ lý kề cận bên Jinshi nên Gaoshun không chỉ giỏi văn mà ông còn vô cùng giỏi võ, thậm chí còn là vệ sĩ bên cạnh Jinshi.

Năm Gaoshun 16 tuổi liền kết hôn với thanh mai trúc mã của mình là Taomei, sau đó sinh ra một người con trai tên Basen. Basen được sinh ra cùng thời điểm với Jinshi và do vậy, điều này lí giải vì sao Gaoshun lại coi Jinshi như con trai của mình và hết lòng vì anh chàng như vậy. Gaoshun thoạt nhìn có vẻ là một người hoàn hảo nhưng ông cũng có một điểm yếu đó là sợ vợ. Chỉ cần vợ của ông ra lệnh một điều gì đó Gaoshun liền làm theo mà không suy nghĩ nhiều.

Vương hậu Lihua (Lệ Hoa) là một trong những vương hậu được hoàng đế nước Lý yêu thích nhất. Lihua cũng được hoàng đế phong cho danh hiệu "Wise Consort" - tức là Vương hậu khôn ngoan. Vương hậu Lihua là chủ nhân của Đình Pha Lê (Crystal Pavilion) đồng thời cũng là mẹ của nhị hoàng tử.

Xét về vẻ bề ngoài lẫn phong thái, vương hậu Lihua luôn là một trong những phi tần xinh đẹp nhất, cô cũng thường xuyên diện những bộ cánh đắt đỏ và xa hoa đính kèm nhiều đồ trang trí để tôn lên được sự kiêu sa của mình. Theo mô típ phim, vương hậu Lihua tượng trưng cho nguyên tố nước và do vậy cô thường xuyên mặc những bộ đồ có tông màu chủ đạo là xanh nước biển kết hợp với màu tím vô cùng mát mắt và dễ chịu.

Vương hậu Lihua có tính cách lạnh lùng, nghiêm túc và có phần cứng nhắc, tuy nhiên thực chất Lihua rất quan tâm tới những người hầu dưới trướng mình và những người xung quanh. Chính sự đối lập này đã khiến cho hoàng đế ngày càng yêu thương và tin tưởng vào vị vương hậu xinh đẹp này.

Vương hậu Lihua là mẹ của nhị hoàng tử và vì vậy cô cũng nắm giữ quyền lực cao trong triều đình. Lihua cũng không nằm ngoài những âm mưu trong chốn thâm cung, vì vậy Lihua luôn cần phải tỉnh táo và đủ thông minh để có thể bảo vệ được bản thân, gia đình cũng như sự bình yên của cả đất nước. Nữ chính Maomao đã có lần cứu vương hậu Lihua khỏi cửa tử một cách ngoạn mục, do vậy Lihua có một niềm yêu mến và tôn trọng Maomao sâu sắc.

Luomen (Lạc Môn) là một trong những nhân vật chiếm được nhiều cảm tình từ phía người xem Dược sư tự sự. Ông vốn là thầy thuốc trong Nội viện, bên cạnh đó ông cũng được biết tới với vai trò bác sĩ trong khu phố đèn đỏ nơi Maomao từng ở - và ông cũng chính là cha nuôi của Maomao.

Luomen có tạo hình là một người đàn ông đã trạc tuổi với mái tóc gần như đã bạc hết toàn bộ thường được buộc gọn gàng phía sau gáy và mang lại cảm giác như một người ông đáng kính với nụ cười hiền hậu thường nở trên môi. Vì một bên xương bánh chè của Luomen đã bị cắt bỏ do có một vài hiểu lầm trong quá khứ nên ông phải đi lại bằng một bên chân còn lại.

Luomen có quá khứ từng đi du học về thuốc và dược liệu ở phương Tây. Trong bối cảnh Trung Quốc thời cổ đại, thường thì những người rất có tài mới được triều đình tin tưởng cử đi học ở nước bạn. Do vậy, tài năng của Luomen đã được thể hiện ở chi tiết đó. Điều làm Luomen được khán giả yêu mến hơn vì tuy tài năng nhưng ông không kiêu căng, trái lại Luomen vô cùng tốt bụng, khiêm tốn tới mức người khác dễ dựa vào điểm này mà bắt nạt ông.

Luomen là một thầy thuốc vừa có tài vừa có đức khi ông thường xuyên tính phí dịch vụ thăm khám của mình có mức giá thấp đi hoặc thậm chí không tính phí hoàn toàn. Luomen cũng là người thầy đưa Maomao tới với ánh sáng tri thức và trở thành một lương y sau này. Tuy nhiên vì một lí do nào đó mà Luomen không cho phép Maomao tiếp thu những kiến thức y khoa phương Tây.

Xiaolan (Tiểu Lân) là bạn của Maomao khi còn là một cung nữ cấp thấp trong nội cung. Xiaolan có vẻ ngoài vô cùng ngọt ngào, dễ thương và mang lại năng lượng tích cực cho mọi người. Vóc dáng của Xiaolan khá nhỏ nhắn với mái tóc màu nâu thường được tết và búi ở phía sau gáy gọn gàng. Xiaolan thường diện một bộ cánh đơn giản của người hầu trong cung.

Xiaolan có một quá khứ đáng thương khi từ khi còn nhỏ cô đã bị chính cha mẹ ruột của mình bán vào trong Nội viện. Mặc dù vậy, cô không bao giờ than thân trách phận hay cảm thấy cuộc đời của mình tăm tối mà luôn nở một nụ cười trước bất kỳ khó khăn nào. Xiaolan cũng luôn cảm thấy bản thân mình vô cùng may mắn khi vẫn còn có chỗ ăn, chỗ ở và có đồ để mặc.

Thân phận nhỏ bé là một cung nữ cấp thấp, Xiaolan có thể dễ dàng nghe lén và lấy thông tin đó lan truyền khắp nơi mà không bị ai chú ý. Điều này khá hữu ích cho Maomao và nhờ vào một số thông tin mà Xiaolan cung cấp, Maomao đã có thêm những manh mối để giải quyết và vén màn nhiều bí ẩn trong cung.

Khi nhiệm kỳ làm cung nữ của Xiaolan kết thúc, cô ra ngoài và bắt đầu tìm kiếm việc làm, sống một cuộc đời tự do hơn. Trong bản tiểu thuyết gốc, Xiaolan được giới thiệu công việc từ một phi tần cấp thấp khác và trở thành người hầu của em gái một Vương hậu.

Là vị vương hậu có thể coi là trẻ nhất trong số các vương hậu của nhà vua, vương hậu Lishu (Lệ Thụ) cũng là người ít nhận được sự sủng ái của hoàng đế và cũng bởi vì cô mới chỉ khoảng 14 tuổi nên ảnh hưởng của cô trong chính trị là không nhiều. Từ khi còn nhỏ, Lishu đã được định sẵn là sẽ trở thành vương hậu của vị vua tiền nhiệm. Sau khi vị vua tiền nhiệm qua đời, Lishu đã được gửi về nước nhưng do hoàn cảnh gia đình ép buộc, Lishu quay trở lại Trung Hoa và làm phi tần cấp cao của hoàng đế hiện tại.

Là chủ nhân của Diamond Pavilion, trong suốt thời gian ở đây hoàng đế không tới thăm cô lần nào và dù vậy điều đó không ảnh hưởng tới tâm trạng của Lishu. Lishu có vẻ ngoài đúng lứa tuổi với đôi mắt màu tím sẫm và mái tóc dài màu nâu buộc nửa đầu. Vương hậu Lishu cũng được nhiều người đồn đoán rằng sau này sẽ trở thành một người xinh đẹp.

Vương hậu Lishu là một người có tính cách trung thực và thẳng thắn, do đang ở độ tuổi dậy thì nên đôi khi Lishu hành xử có phần ngang bướng và xốc nổi nhưng nhìn chung, Lishu vẫn là một cô bé ngây thơ và thiếu hiểu biết về thế giới xung quanh. Chính vì vậy, Lishu thường xuyên là đối tượng để những người hầu xung quanh bắt nạt.

Lihaku (Lí Bạch) là một quan chức lớn trong nội cung và đồng thời cũng là người quen của Maomao. Lihaku có vẻ ngoài điển trai với vóc dáng cao ráo, cơ bắp khỏe mạnh săn chắc và thân hình cân đối nhờ việc rèn luyện thường xuyên. Khuôn mặt của Lihaku rất đẹp trai nhưng khi anh chàng nổi giận thì lại trở nên khá đáng sợ.

Lihaku thường được miêu tả là có tính cách tốt bụng, trung thực và dễ mến. Bên cạnh đó, Lihaku cũng mang một tinh thần thép và điều đó được thể hiện rõ nét nhất khi anh chàng tỏ ra không hề bối rối trước đại nạn dịch châu chấu ở thủ đô phía Tây. Lihaku có một tình yêu cháy bỏng với một kỹ nữ tên Pairin - một trong ba kỹ nữ nổi tiếng nhất của Verdigris House. Lihaku luôn cố gắng hết mình để có thể chuộc lại Pairin từ kỹ viện. Jinshi và Lihaku ban đầu có ấn tượng không tốt đẹp lắm về nhau nhưng qua thời gian, hai người đã trở thành bạn bè và có một tình bạn đẹp.

Có một sự thật nữa khá thú vị về Lihaku là tên của anh chàng được đặt theo tên của một trong những nhà thơ nổi tiếng nhất Trung Quốc thời Đường. Cái tên này thể hiện sự kính trọng tuyệt đối dành cho một thiên tài thơ ca của Trung Quốc cổ đại đồng thời cũng tạo nên chiều sâu cho nhân vật Lihaku.

Vương hậu Fuyou (Phù Dung) tuy thời lượng xuất hiện không dài nhưng trong những phân cảnh cô xuất hiện đều khiến cho người xem có những ấn tượng sâu sắc. Xuất thân là công chúa của một vùng đất xa xôi bất đắc dĩ phải trở thành vật cầu hòa giữa hai nước, chắc chắn Fuyou không hề vui vẻ gì nhưng cô vẫn luôn làm tròn bổn phận của mình.

Fuyou có vẻ ngoài xinh đẹp với mái tóc đen dài thường được tạo kiểu cầu kì và cô cũng thường mặc những bộ cánh cao cấp nhất xứng đáng với địa vị và xuất thân của mình. Vì thời lượng xuất hiện khá ít nên tính cách của Fuyou không được bộc lộ nhiều nhưng người trong cung thường miêu tả cô rất thông minh.

Vương hậu Fuyou có mối tình sâu sắc với một vị tướng nhưng thân phận của vị tướng này lại thấp hơn cô. Sự thật trái ngang rằng vị tướng đó sẽ không bao giờ có đủ tiềm lực để cưới được Fuyou làm thê tử cho dù vị tướng đó vừa đánh thắng một trận chiến và có thể chọn lựa một thê tử cho mình. Fuyou đã tình nguyện hằng đêm nhảy múa trước ánh trăng khiến trong cung xuất hiện tin đồn rằng cô là ma nữ bị động kinh. Điều này sẽ khiến giá trị của Fuyou giảm đi và vị tướng kia có thể đủ tiềm lực để cưới nàng. Vương hậu Fuyou đã trở thành biểu tượng cho đức tính hy sinh và lòng trung thành sâu sắc dành cho người bạn đời của mình.